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國防醫學院 生物及解剖學研究所 藍心婕所指導 林㛄廷的 以混合淋巴球反應的實驗模式研究 雙酚A (BPA)對滋養層細胞的影響 （2021），提出hcg懷孕中文關鍵因素是什麼，來自於雙酚A、滋養層細胞、混合淋巴球反應、免疫耐受性。
而第二篇論文國立臺灣大學 臨床醫學研究所 陳美州所指導 黃楚珺的 多囊性卵巢症候群之臨床表徵與致病機轉 （2019），提出因為有 多囊性卵巢症候群、誘導性多功能幹細胞、細胞通透性、DNA 甲基化、微小核醣核酸、超基因調控、顆粒細胞、CREB、platelet factor 4的重點而找出了 hcg懷孕中文的解答。
以混合淋巴球反應的實驗模式研究 雙酚A (BPA)對滋養層細胞的影響
為了解決hcg懷孕中文 的問題，作者林㛄廷 這樣論述：
胎盤滋養層細胞 (trophoblasts)在母胎介面 (maternal-fetal interface)是主要維持免疫平衡的調節細胞，當同種異源 (allogenic)的胎兒被母體免疫系統視為外來刺激時，滋養層細胞則會發揮出免疫耐受 (immune tolerance)的功能。此外，也有許多研究指出滋養層細胞會受到環境內分泌干擾因子 (endocrine-disrupting chemicals, EDCs) 雙酚Ａ (bisphenol A, BPA)的影響，導致過度的免疫混亂的發生。然而，在胎盤免疫微環境中，滋養層細胞和蛻膜免疫細胞群 (decidual immune cel
ls) 的交互作用是多個面向且十分複雜的。為了瞭解BPA對於滋養層細胞和蛻膜免疫細胞的影響，我們建立了混合淋巴球試驗 (mixed lymphocyte reaction, MLR)的實驗模式，希望能部分模擬母胎介面中同種異源性 (allogenicity)的免疫排斥， 同時觀察滋養層細胞調節免疫細胞的能力。實驗中我們利用BALB/c和C57BL/6雄性小鼠的脾臟樹突細胞 (splenic dendritic cells, DCs)和T細胞 (splenic T cells)作為刺激細胞 (stimulators)和反應細胞 (effectors)共同培養，再利用細胞流式儀 (flow cyt
ometry)和西方點墨法 (western blot)來觀察T細胞增生 (T cell proliferation)和分化 (T cell differentiation)，並且利用發炎蛋白抗體晶片 (inflammatory antibodymembrane array)和ELISA來評估細胞激素的分泌 (cytokine profile)，藉此確認免疫微環境是傾向促發炎或抗發炎的組成。其中，我們會於MLR模式中分別加入人類胎盤滋養層細胞 (JEG-3)有或無經過BPA處理的條件培養基 (conditioned medium)，比較經過BPA處理後JEG-3細胞和正常的JEG-3細胞的差異
。 目前的實驗結果顯示，在MLR模式中，JEG-3細胞的條件培養基可以顯著地抑制T細胞的增生，並促進具有免疫抑制特性的第二型輔助性T細胞 (helper T cell type 2, Th2) 和調節性T細胞 (regulatory T cell, Treg)之分化；反之經過BPA處理後的JEG-3條件培養基，則會顯著地促發T細胞的增生，並且進一步顯著抑制免疫抑制型細胞的分化。而在ELISA的結果中顯示，經過BPA處理後的JEG-3條件培養基在MLR模式中會顯著增加CCL9、IFN-γ的分泌。依據實驗結果，我們認為BPA可能影響滋養層細胞免疫耐受的能力，並且使母胎介面的免疫微環境傾向促發
炎的組成，而找出BPA和懷孕併發症之間的關聯性仍需要更多實驗來證實。
多囊性卵巢症候群之臨床表徵與致病機轉
為了解決hcg懷孕中文 的問題，作者黃楚珺 這樣論述：
多囊性卵巢症候群 (Polycystic ovarian syndrome, 簡稱PCOS) 是育齡婦女最常見的內分泌疾病，其臨床表徵十分多元且個體變異性極高，在青少年時期，病患可能出現無月經或者月經不規則、多毛症、嚴重痤瘡、肥胖、雄性禿等症狀；到了生育年齡則可能面臨不孕，並在懷孕期間出現較高機率的流產、妊娠糖尿病、子癲前症、早產等風險；在新陳代謝方面，胰島素阻抗或第二型糖尿病、高血壓、高血脂等代謝症候群的發生率顯著上升，子宮內膜增生或者子宮內膜癌的機率也增加，因此對婦女健康的影響極為廣泛而深遠。而此複雜疾病無論是從診斷標準、致病機轉、治療方針甚至於長期預後，都尚有許多未解之謎題仍待進一步研
究釐清，因此博士班期間將針對此疾病進行一系列臨床與基礎研究。 在第一個研究中，為了進一步釐清此複雜症候群之臨床表徵分群模式，並針對其新陳代謝風險找出預後危險因子，我們使用了強大且創新的統計學圖表分析法--廣義相關圖（generalized association plots，GAP），來分析多囊性卵巢症候群病患的症狀模式和特徵分群。我們首先運用關聯性分析，找出與多囊性卵巢症候群之新陳代謝異常最為相關的四個內分泌指標 (FSH, LH, free androgen index, DHEA-S)，接著依照這四個內分泌指標表現值相近度，將總共460名多囊性卵巢症候群患者分為四個次族群，每個次族
群中的個體即這四個內分泌指標表現最相近的一群病患。結果可發現，所分出的四個次族群，不僅各自具有獨特的內分泌表徵，也同時具有顯著不同的新陳代謝異常風險。當病患出現高free androgen index數值且低LH濃度時，將會是罹患新陳代謝症候群的高風險群，這些患者可更密集地接受新陳代謝相關追蹤檢查，倘若病患出現低free androgen index數值且高LH濃度時，則可告知病患日後得到新陳代謝異常風險與同齡女性無異，應可降低不必要的追蹤檢測和健保花費，也可降低病患之焦慮不安。我們的研究成功的將患者進行了良好分組，也找出了與新陳代謝風險相關的內分泌特徵。 在第二個研究中我們針對多囊性卵
巢症候群的致病機轉進行研究，由於多囊性卵巢症候群最重要的臨床症狀之一是濾泡成長異常和排卵失調，而卵巢濾泡液的生成也是濾泡成長過程重要的一環，故我們首先分析了卵巢濾泡液是如何調控相鄰內皮細胞之通透性，並針對其成分進行分析。我們先以單層人類臍靜脈內皮細胞裝置分析11 位多囊性卵巢症候群和9位對照組受試者卵巢濾泡液對於內皮細胞通透性的調節，發現多囊性卵巢症候群患者的濾泡液會使得相鄰內皮細胞通透性顯著下降，由於細胞通透性與血管生成因子有關，故進一步以晶片分析13位多囊性卵巢症候群和11位對照組受試者卵巢濾泡液中的血管生成因子濃度，晶片所偵測的55種血管生成因子中，我們發現多囊性卵巢症候群病患的濾泡液表
現較高濃度的Platelet factor 4(PF4)，且PF4會與IL-8進行拮抗性結合，抑制細胞間隙的生成並降低相鄰內皮細胞的通透性，我們的發現不僅提供了多囊性卵巢症候群致病機轉的另一種新解釋，而且也讓我們對於PF4與卵巢功能相關之細胞生理機轉有更進一步的了解。 多囊性卵巢症候群具有高度遺傳性，但在過去眾多基因關聯性研究中卻找不出顯著致病基因，故被認為可能是一個多基因遺傳疾病。然而針對其高度遺傳性的另一個可能解釋是超基因調控 (epigenetics)，過去相關文獻甚少，故在第三個致病機轉相關研究中，我們將針對超基因調控其中一種重要機轉 – DNA甲基化進行研究，針對卵巢顆粒細胞運
用晶片分析全基因體DNA甲基化表現，試圖釐清多囊性卵巢症候群和對照組之間是否有顯著DNA甲基化差異。在這個研究中我們分析了兩種卵巢顆粒細胞，一種是成人卵巢顆粒細胞，代表成熟的疾病細胞，另一種是從誘導性多功能幹細胞 (induced pluripotent stem cells, iPSCs) 再次分化衍生出的卵巢顆粒細胞(分化第十二天)，代表處於剛分化階段的初始細胞。DNA甲基化晶片的分析結果顯示多囊性卵巢症候群患者的iPSC衍生顆粒細胞和成人顆粒細胞均出現CREB訊息傳導路徑過度活化的情形，後續的西方墨點法亦驗證了多囊性卵巢症候群組有較高的CREB蛋白和CBP蛋白表現量，此發現可為多囊性卵巢
症候群的致病機轉和臨床表徵提供嶄新而合理的解釋。 由於微小核醣核酸 (miRNA) 調節也是超基因調控重要的機轉之一，且血液游離微小核醣核酸的表現在許多疾病研究中已經被證實有良好的臨床診斷及預測預後功效，故在第四個研究中，我們欲分析血液游離微小核醣核酸是否可以作為多囊性卵巢症候群的臨床診斷和療效預測之生物指標。我們從文獻中選擇了14種可能與多囊性卵巢症候群致病機轉相關的標的微小核醣核酸，在75個多囊性卵巢症候群病患和20個對照組受試者的周邊血液進行逆轉錄聚合酶鏈式反應 (rtPCR) 測量。在第一個階段的標的微小核醣核酸測量中，我們發現多囊性卵巢症候群患者與對照組受試者的血液游離微小核醣
核酸表現模式有顯著不同，多囊性卵巢症候群患者的血液miR-93, miR-132, miR-221, miR-223, miR-27a, miR-212表現值相較於對照組顯著較高，而miR-222和miR-320a表現值顯著較低。此外，metformin藥物在臨床上可改善50%患者的排卵功能和月經週期，然而目前並無方法可預測其療效，故我們分析了metformin治療有效和無效兩組之間的微小核醣核酸表現，亦發現有顯著差異。第二個階段為模型建立，我們以miR-93、miR-132、miR-222、miR-27a、miR-125b、miR-212這六個最具顯著差異的微小核醣核酸表現值，建立了多囊性卵
巢症候群的診斷模型，其接收者操作特徵 (receiver operating characteristic, ROC) 曲線下面積 (area under curve, AUC) 高達0.96，對於受試者是否符合多囊性卵巢症候群臨床診斷有極佳的預測性。此外我們針對metformin是否具有改善排卵的臨床療效，也以miR-132, miR-27a, miR-222, miR-93這四個微小核醣核酸表現值建立了預測模型，並成功在另一個獨立的多囊性卵巢症候群病患族群中驗證其預測效果，藉由此預測模型，可以幫忙預測患者是否可以在接受metformin治療後，出現排卵功能及月經週期上的改善，對於臨床治療的
療效預測和藥物選擇有所助益。 總結以上四個研究所獲得的成果，從病患卵巢濾泡液、卵巢顆粒細胞、血液檢體、到病患專一性iPSC細胞株的建立，透過各種分析方法，在臨床症狀、疾病診斷、疾病預後、致病機轉以及臨床治療上都有許多新的發現，包括：臨床症狀的分組解析和新陳代謝症候群危險因子的探尋、濾泡液中血管生成因子與其潛在影響內皮細胞通透性之機轉解析、病患專一性及多囊性卵巢症候群特異性iPSC之建立與再分化研究、全基因體DNA甲基化分析所發現之CREB訊息調控路徑異常對於致病機轉之可能影響、以血液游離微小核醣核酸建立之多囊性卵巢症候群診斷模型和metformin療效預測模型，無論是研究過程所積累的經驗
，或者是所獲得的種種研究成果，都為日後多囊性卵巢症候群相關基礎或臨床研究提供了大量的工具和材料，在臨床醫療的診斷和治療也有諸多貢獻。