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篩選含助孕素活性及抗助孕素活性之中草藥及其應用
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人工合成助孕素對婦女健康有不良的影響,例如引起乳癌及心血管疾病。透過動物糞便及尿液排出的助孕素代謝物會干擾動、植物的內分泌。因此,大部分已開發國家已經禁止助孕素使用在畜牧產業,並尋找自然的替代品。本研究的目的為篩選具有助孕素活性或抗助孕活性的中藥,並探討用於畜產動物的繁殖和人體健康的可行性。在實驗一中,將PRE(progesterone response element)和 TATA啟動子植入含有多重篩選位的pGL3載體中,構築能對助孕素反應的質體pGL3-2PRE-TATA。將pGL3-2PRE-TATA轉染到T47D人類乳癌細胞中,並在不同濃度的助孕素下培養,結果顯示此質體對助孕素非常敏
感,在從1 nM 到1 µM濃度範圍皆有反應,但對其他類固醇並無反應。實驗二,利用酒精萃取的十三種中草藥在以實驗一中所建立的助孕素活性測試方法測試助孕素及抗助孕素的活性。在這十三種中藥中,Dipsacus asperoides含有助孕素活性(P < 0.05),其他十種中藥Cortex eucommiae, Folium artemisiae argyi, Glycyrrhiza uralensis, Angelica sinensis, Atractylodes macrocephala Koidz, Scutellaria baicalensis, Cuscuta chinensis, E
uscaphis japonica, Ailanthus altissima, Dioscorea opposita於40 µg/ml濃度下具有抗助孕素的活性,此外,在細胞毒性測試中顯示並無任何一種中藥酒精萃取物會對PAE細胞造成毒性傷害。實驗三,探討飼糧中添加川芎對女豬繁殖週期同期化的調控。將女豬分別餵食20 mg四烯雌酮、100克川芎或正常飼糧三種組別,持續22天,並在第22天未餵食前採血。血清助孕素濃度及與FSH濃度分別由實驗一所建立的助孕素活性測試方法和酵素連結免疫分析法測定。所有餵食川芎的女豬和五隻餵食四烯雌酮的女豬在停止餵食後之2到6天內發情,但是控制組並無發情的情況,此結果顯示川
芎含有助孕素活性,可提升動物體內助孕素活性,達到發情同期化的目的。此外,血清分析結果顯示,餵食四烯雌酮及川芎組別的助孕素活性FSH量皆呈現相似曲線。實驗四,探討含抗助孕素活性的甘草對T47D人類乳癌細胞增殖的影響。甘草酒精萃取物由冷光酶報告基因測試含有抗助孕素活性;利用MTT方法測試發現甘草酒精萃取物對細胞增殖有抑制作用。以RT-PCR方法測量PR(progesterone receptor) mRNA的表現量及以流式細胞儀測試細胞週期及細胞凋亡。結果顯示甘草萃取物具有抗助孕素的活性,抑制PRB mRNA表現量及抑制T47D人類乳癌細胞增殖。甘草萃取物也會抑制細胞週期的G1/S階段並誘導細胞凋
亡。總結,含助孕素、抗助孕素活性中草藥或是其萃取物可以應用於動物繁殖,也可以用在人類醫療上並取代人工合成助孕素或是抗助孕素。
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