冰冷的城市需要更多的綠手指論文書籍站
國立嘉義大學 生物農業科技學系研究所 李互暉所指導 李毓昂的 在乳腺細胞及基因轉殖小鼠上乳腺專一性表達顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子 （2020），提出hiv pcr檢測關鍵因素是什麼，來自於顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子、體外受精、慢病毒、基因轉殖。
而第二篇論文國立臺灣大學 應用力學研究所 許聿翔所指導 黃庠棋的 可應用於薄膜式微流體平台之快速聚合酶連鎖反應系統開發 （2020），提出因為有 COPD、miR-15b、微流體PCR、COP薄膜晶片、快速PCR的重點而找出了 hiv pcr檢測的解答。
在乳腺細胞及基因轉殖小鼠上乳腺專一性表達顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子
為了解決hiv pcr檢測 的問題，作者李毓昂 這樣論述：
GM-CSF (granulocyte-macrophage colony-stimulating factor)，顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子，是一種大小為23 kDa，由 127 個胺基酸所組成，構型為單體醣蛋白的小分子蛋白質，是人體中一種重要的細胞因子。尤其在免疫反應上，從造血幹細胞的分化；下游的嗜酸性球、嗜中性球、嗜鹼性球和巨核細胞的成熟；單核球分化成巨噬細胞；巨噬細胞的成熟與分化，GM-CSF 都在其中扮演著不可或缺的調控角色。而在臨床上，GM-CSF 也常被用來治療許多關於造血缺陷所產生之疾病，包括像骨髓造血功能不良症候群、白血病等；而對於有些因癌症化療而產生巨噬細胞與中性顆粒白
血球低下的病患，GM-CSF 也能增加這些白血球的數量。而目前於商業上，GM-CSF 製作方法大多為利用體外細胞培養，產出特定表現蛋白質，並加以收集及純化，有著產量低、製作成本高的問題。因此，本實驗室希望能夠研發一套方法，將像是 GM-CSF這種高單價蛋白以較低成本的方式大量生產出來，最終目標為將 GM-CSF 於經濟動物如牛、豬或羊的乳汁中表達。目前實驗室已經成功篩選出 4 kb 大小之山羊β酪蛋白基因上游序列，並驗證其具有乳腺細胞專一性之啟動子表達能力，且成功與 GM-CSF 基因一同構築於慢病毒表達載體內。本篇論文將接續先前實驗，首先檢測此新構築好之 4kb-GM-CSF 慢病毒表達載體
，是否在乳腺細胞 (MCF-7) 中，具有專一表達能力，並能夠產出目標蛋白 GM-CSF。之後，我們也比較此種經由乳腺專一性表現的GM-CSF蛋白，與經由CMV (cytomegalovirus) 啟動子，持續性表達所產生的蛋白，是否都具有功能性。我們將 4kb-GM-CSF 慢病毒表達載體分別轉染至MCF-7 細胞及脂肪前驅細胞 (3T3-L1) 後，檢測其胞內及胞外蛋白，結果顯示只有在乳腺細胞 MCF-7能專一性表達目標蛋白 GM-CSF。接著分別將 4kb-GM-CSF載體與 CMV-GM-CSF 持續性表達載體轉染至 MCF-7 細胞後，純化其胞內及胞外蛋白，檢測其 GM-CSF蛋白表
現量，結果顯示持續性表達的 CMV 啟動子比 4 kb 乳腺專一啟動子還能夠產出更多 GM-CSF；以相同方式分別轉染兩載體至 MCF-7 細胞，待 GM-CSF分泌至胞外培養液後，將此條件式培養基 (conditioned medium) 抽出，並用於培養巨噬細胞 (RAW-264.7)，與一般培養基培養之巨噬細胞相比，進一步分析巨噬細胞形態、分化程度與生長速率。結果顯示，轉染 CMV-GM-CSF 載體後之細胞條件式培養基培養之巨噬細胞，其形態改變最多、分化程度為最高，但生長速率最慢；次之為 4kb-GM-CSF 載體產生的條件式培養基，最後為標準培養基培養之巨噬細胞型態改變最少、分化程度
最低，生長速率最快。此結果證明4 kb 乳腺專一啟動子所產出之 GM-CSF 仍然具有功能性，但因為在同體積的條件式培養基中產生較低量GM-CSF，與持續性表達的啟動子相比，效用較低。接著將 4kb-GM-CSF 載體以慢病毒包裹起來，並感染去除透明帶之 4 ~ 8-cell 階段的小鼠胚，待其發育至囊胚後，移植入代理孕母鼠體內，冀望產出乳腺專一表達GM-CSF 之基因轉殖小鼠。結果顯示，將總計 56 個 GM-CSF 基因轉殖囊胚移植入 4 隻代理孕母鼠子宮內，其中有 3 隻母鼠正常懷孕生產獲得 19 (45.2%) 隻仔鼠，其中有 10 (52.6%) 隻經過 PCR 檢測其基因體中帶有4
kb-GM-CSF載體之 WPRE 序列。將此 10 隻帶有轉殖基因之仔鼠(F0, Founder)之中的 4 隻母鼠，與 C57BL/6NCrlBltw 公小鼠配種，待其懷孕後生產，並收集乳汁。共計產下 59 隻 F1 子代，其中有 22 (37.3%) 隻經過 PCR 檢測其帶有4kb-GM-CSF載體之 WPRE 序列，並且 F0 乳汁中也有檢測出目標蛋白 GM-CSF 表達，證明 4kb-GM-CSF 載體有成功轉殖進入小鼠，並具有生殖系傳遞(germline transmission) 能力，4 kb 乳腺專一啟動子也成功於小鼠乳腺驅動，產出含有 GM-CSF 蛋白之乳汁。
可應用於薄膜式微流體平台之快速聚合酶連鎖反應系統開發
為了解決hiv pcr檢測 的問題，作者黃庠棋 這樣論述：
COPD，慢性阻塞性肺病為受過敏原或刺激物刺激，氣管及肺泡發生慢性發炎之疾病，據統計，臺灣一年超過5000人因 COPD 死亡，且其病程為不可逆反應，目前唯一的方法為減少病人之發病機會，所以個人化之COPD檢測系統有其必要性。越來越多研究證實，miRNA之表現量與特定疾病之關係，而體內之miR-15b基因也被證實與COPD疾病有關，因此本研究選擇miR-15b作為COPD之檢測標誌，開發一種薄膜型快速聚合酶連鎖反應微流體裝置，用以作為慢性阻塞性肺病之 定點照護(Point of care)裝置。 在微流體平台的領域中，PCR技術已受到矚目，其優勢為所需樣品量較少，樣品熱質量降低，也提高了熱
循環之效率，不過在許多研究中的微流體晶片使用了半導體製程，製程昂貴，商品化難度高，而塑膠微流體晶片雖然成本較低且生產容易，但塑膠材質的缺點在於塑膠熱傳導差，且常規塑膠製程下厚度不容易低於1mm，不利於PCR之熱循環。為了解決此一問題，本研究開發出了一種薄膜塑膠晶片之熱壓印技術以及薄膜熱結合技術，以吸水率極低之環烯烴聚合物薄膜，製作出厚度僅約0.288mm之薄膜晶片，突破傳統塑膠製程之厚度最低只能到1mm的限制，與之相比，本研究之薄膜晶片厚度減少了至少3.5倍，由熱傳導方程式可知，固體熱傳導速度與距離成反比，此薄膜晶片將有效改善塑膠晶片之熱傳導效率，進而加速PCR熱循環速度。另外COP低吸水性，
於實驗中證明所開發的COP薄膜PCR晶片在10至40個熱循環後體積吸收率均小於1.5%。本研究中提出了兩款可應用於薄膜微流體晶片之小型化快速溫度循環系統，利用致冷晶片作為系統加熱元件，並在致冷晶片表面加入了切割後之矽晶片以及石墨片，藉此改善致冷晶片表面溫度分布均勻度，使致冷晶片表面各區最高溫度之平均值誤差小於1°C，本研究並實驗證明此裝置可在10分鐘內對原始濃度為10e11至10e7 copies/μl之miR-15b模板基因完成40個PCR循環擴增，單次循環平均為13.75秒，與擴增前之螢光值分別提高了3.73倍至2.3倍，整體工作時間比一般大型PCR儀器快7倍以上。 本研究成功整合薄膜塑
膠生物晶片製程開發、薄膜晶片注射裝置、快速熱循環加熱器，成功降低了PCR 檢測之設備成本以及耗材成本。