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國立陽明大學 傳統醫藥研究所 傅淑玲所指導 李柏萱的 穿心蓮內酯在惡性乳癌細胞MDA-MB-231的抗癌活性及機轉探討 （2013），提出hiv rt pcr費用關鍵因素是什麼，來自於穿心蓮內酯、乳癌。

而第二篇論文國立成功大學 生命科學系碩博士班 陳世輝所指導 謝耀清的 牛流行熱病毒之抗原性分析、疫情監控、快速診斷方法與新型雙價疫苗之研發 （2006），提出因為有 抗原性分析、疫情監控、新型雙價疫苗之研發、牛流行熱病毒、快速診斷方法的重點而找出了 hiv rt pcr費用的解答。

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穿心蓮內酯在惡性乳癌細胞MDA-MB-231的抗癌活性及機轉探討

為了解決hiv rt pcr費用的問題，作者李柏萱 這樣論述：

穿心蓮內酯 (andrographolide)為穿心蓮葉中的主要萃取成分，先前研究證實具有抑制多種癌症特性的效果，例如能改變細胞週期或調控細胞凋亡現象，並且以大腸癌細胞與乳癌細胞的生長抑制效果最佳。乳癌一直是婦女癌症中最常發生的癌症種類，而其中三陰性乳癌更是乳癌亞型中最為惡性、最難以治癒的種類。另一方面，Thoc1是transcription/export complex (TREX)中的成員，主要作用為幫助RNA pol II製造RNA、以及協助RNA運送到細胞質。過去的研究中證實Thoc1表現量與乳癌細胞的惡性程度呈正相關，並且過量表現Thoc1能促進腫瘤的生長、惡化與轉移，顯示Thoc

1是一個具發展潛力的藥物標的蛋白。目前關於穿心蓮內酯對三陰性乳癌抑制作用的相關探討仍十分有限，另外穿心蓮內酯對於Thoc1表現量的影響也未被證實。因此本實驗中選擇使用有較高Thoc1表現量的三陰性乳癌細胞MDA-MB-231進行研究，探討穿心蓮內酯及其衍生物能否透過調控Thoc1影響MDA-MB-231的生長及存活，並研究穿心蓮內酯造成MDA-MB-231細胞死亡的分子機轉。 首先本研究以MTT分析穿心蓮內酯對三陰性乳癌細胞MDA-MB-231生長能力的影響，實驗結果發現穿心蓮內酯能抑制MDA-MB-231的細胞生長，而對正常纖維母細胞BJ-1的影響較弱。經西方墨點法測試發現，穿心蓮內酯

能誘發細胞自噬蛋白LC3-Ⅱ的表現量，並且促進細胞自噬小體的產生，另外實驗中也發現穿心蓮內酯能夠誘發細胞凋亡指標蛋白cleaved caspase-3表現量。使用抑制劑3-MA與Z-VAD-FMK分別抑制穿心蓮內酯所誘發的細胞自噬與細胞凋亡，結果顯示抑制細胞自噬可能會導致細胞凋亡蛋白cleaved caspase-3的下降，但抑制細胞凋亡則不會影響細胞自噬指標蛋白LC3-Ⅱ的表現量。另外實驗中也發現，穿心蓮內酯能夠抑制Thoc1的表現量，而經由Thoc1敲除及過量表現的實驗證實Thoc1與細胞自噬作用及細胞凋亡的皆有關聯。但Thoc1 在穿心蓮內酯所引發細胞自噬及細胞凋亡中的角色則有待進一步探

討。 本實驗當中也針對幾種穿心蓮內酯的衍生物進行實驗，發現其中NCTU-322及Andro-NBD能以較低濃度抑制Thoc1表現量、誘發細胞自噬並促進細胞死亡，而且其有效濃度對正常纖維母細胞BJ-1影響較小，為穿心蓮內酯衍生物中值得繼續發展的藥物。 總結上述研究，穿心蓮內酯能透過促進細胞自噬與細胞凋亡現象抑制MDA-MB-231乳癌細胞的生長，同時也能抑制與乳癌相關致癌蛋白Thoc1的表現量，顯示穿心蓮內酯在三陰性乳癌的治療上有一定的發展潛力。

牛流行熱病毒之抗原性分析、疫情監控、快速診斷方法與新型雙價疫苗之研發

為了解決hiv rt pcr費用的問題，作者謝耀清 這樣論述：

牛流行熱 (bovine ephemeral fever,BEF) 的病原為子彈型病毒科 (Rhabdoviridae) 之牛暫時熱病毒屬 (bovine ephemeral fever virus, BEFV) ，是經由吸血性節肢動物傳染，引起牛隻急性發熱性傳染病，造成牛隻死亡或淘汰、流產、產乳量下降、治療費用極高及乳汁的廢棄等鉅大損失。本省氣候高溫多濕，對蚊蟲媒介的根除並不容易，隨著抗體的消長，週期性的爆發是可以預期的。過去40年來，本省曾爆發8次BEF疫情，本病若能早期診斷、早期治療，則預後良好，但是目前BEF市售疫苗仍選用1984年分離株製備，急待改進，而台灣地區本病之流行狀況，病毒

變異標準、傳統血清學及快速分子診斷技術也都尚未建立，故本研究即以台南縣家畜疾病防治所保存之1984及1996年病毒株以及1999至2004年在台南縣轄內牛場分離之病毒株為材料，進行下列實驗，包括 (1)病毒分離及確認：本試驗分別於1999、2001及2004年檢測疑似感染病牛之血液檢體及解剖5頭感染BEF牛隻，經BHK-21細胞分離、反轉錄酶聚合酶鏈鎖反應 (RT-PCR) 、核酸序列定序、電子顯微鏡檢查及動物接種確認為BEFV； (2)不同分離株抗原性分析：分析17株病毒G醣蛋白全長基因序列，結果顯示2004年分離之病毒株與1996至2001年分離病毒株核酸序列差異約1-1.2%，而與198

4年疫苗株差異度約2.1-2.5%，經樹狀親源分析發現1984年與1996至2004年分離株可被區分為2群； (3)建立分子診斷技術：本研究針對病毒醣蛋白G基因設計特異性引子及核酸探針，建立RT-PCR、TaqMan即時定量聚合酶鏈鎖反應 (TaqMan-based real time PCR) 及生物活性增幅雜合反應(bioactive amplification with probing, BAP)等快速診斷方法，結果顯示BAP反應敏感度可偵測1 copy病毒。經檢測及比較34個臨床檢體之敏感度，以BAP反應檢出率72.73%最高，可達到早期偵測之效果； (4)研發酵素免疫結合吸附法(EL

ISA)套組：因血清中和抗體試驗操作過程費時又費力，無法大量篩檢樣品，本研究以純化BEF病毒來研發ELISA檢測套組，並經抗原抗體定量試驗與4次中和抗體相關性重複性試驗，結果顯示此套組之OD值與中和抗體相關性佳，相關係數達0.80 (R值)； (5)牛群免疫接種疫苗成效監控：以血清中和抗體試驗在2002-2004年進行牛隻血清抗體監測，結果顯示每年牛隻經疫苗補強後，血清中和抗體力價約維持4-5個月後開始消退，中和抗體力價呈逐年下降(P

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